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激光共聚焦顯微鏡原理及應用的介紹

返回列表 來源:本站 發(fā)布日期:2023-10-11 10:53:12【

激光共聚焦顯微鏡簡介:是一種高科技顯微鏡;它是在熒光顯微鏡成象的基礎上加裝激光掃描裝置,使用紫外光或可見光激發(fā)熒光探針,從而得到細胞或組織內部微細結構的熒光圖像,成為形態(tài)學、分子細胞生物學、神經(jīng)科學、藥理學、遺傳學等領域新一代強有力的研究工具。

激光共聚焦顯微鏡.jpg

激光共聚焦顯微鏡原理:

在普通寬視野光學顯微鏡中,整個標本全部都被水銀弧光燈或氙燈的光線照明,圖像可以用肉眼直接觀察。 同時,來自焦點以外的其他區(qū)域的熒光對結構的干擾較大,尤其是標本的厚度在 2um 以上時,其影響更為明顯。

激光共聚焦顯微鏡脫離了傳統(tǒng)光學顯微鏡的場光源和局部平面成像模式,采用激光束作光源,激光束經(jīng)照明針孔,經(jīng)由分光鏡反射至物鏡,并聚焦于樣品上,對標本焦平面上每一點進行掃描。 組織樣品中如果有可被激發(fā)的熒光物質,受到激發(fā)后發(fā)出的熒光經(jīng)原來入射光路直接反向回到分光鏡,通過探測針孔時先聚焦,聚焦后的光被光電倍增管(PMT)探測收集,并將信號輸送到計算機,處理后在計算機顯示器上顯示圖像 。 在這個光路中,只有在焦平面的光才能穿過探測針孔,焦平面以外區(qū)域射來的光線在探測小孔平面是離焦的,不能通過小孔。因此,非觀察點的背景呈黑色,反差增加,成像清晰。由于照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔與探測針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,即共聚焦。 以激光作光源并對樣品進行掃描,在此過程中兩次聚焦,故稱為激光掃描共聚焦顯微鏡。

激光共聚焦顯微鏡應用范圍:

激光共聚焦顯微鏡是近代Z先進的細胞生物醫(yī)學分析儀器之一。它是在熒光顯微鏡成像的基礎上加裝激光掃描裝置,使用紫外光或可見光激光熒光探針,利用計算機進行圖像處理,不僅可觀察固定的細胞、組織切片,還可對活細胞的結構、分子、離子進行實時動態(tài)地觀察和檢測。激光掃描共聚焦顯微技術已用于細胞形態(tài)定位、立體結構重組、動態(tài)變化過程等研究,并提供定量熒光測定、定量圖像分析等實用研究手段,結合其他相關生物技術,在形態(tài)學、生理學、免疫學、遺傳學等分子細胞生物學領域得到廣泛應用。

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