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什么是激光共聚焦顯微鏡以及它的成像原理介紹

返回列表 來源:本站 發(fā)布日期:2023-10-31 10:01:40【

共聚焦顯微鏡是激光共聚焦顯微鏡的簡稱,它顯微成像主要采用 3D 捕獲的成像技術(shù),使其具有較高的三維圖像分辨率。這 些都是 通過構(gòu)建顯微照片來實現(xiàn)的。在熒光顯微鏡使用過程中,由于需要高強度紫外光輔助成像,所以顯微鏡 內(nèi)的汞弧燈產(chǎn)生的強光可能會導(dǎo)致令人不安的背景噪音,甚至會導(dǎo)致光漂白。 激光共聚焦顯微鏡則是通過數(shù)碼相機針孔的高強度激光來實現(xiàn)數(shù)字成像的技術(shù),有效避免了熒光顯微鏡所產(chǎn)生的問題。

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激光共聚焦顯微鏡的成像原理:

激光共聚焦顯微鏡中的圖像是來自一個焦平面的光通過針孔數(shù)碼相機聚焦拍攝,從而規(guī)避 來自其支點上方或下方的光。固定在設(shè)備上的激光連續(xù)聚焦在樣品的選定區(qū)域,同時,被樣品吸附的熒光染料也會被數(shù)碼相機捕捉。共聚焦設(shè)備包含兩個旋轉(zhuǎn)鏡頭用來拍攝組圖。

然后通過所累積的不同焦平面的圖像序列,使用軟件編譯完整的 3d 圖像。此圖像可以在軸向(z 軸)和橫向(x 和 y 軸)平面進行微調(diào)。這些細胞和其他矩陣的再現(xiàn)是通過使用雙倒置的光錐照亮物體來實現(xiàn)的。

使用標準落射熒光顯微鏡所存在的問題是當遇到較厚的基質(zhì)或標本時所表現(xiàn)出的熒光程度較大。大于 2 微米的樣品發(fā)出的輻射會危及生成圖像的準確性,從而損失成像的細節(jié)。而激光共聚焦顯微鏡則可以通過縮小激發(fā)范圍并使用光學切片來消除背景噪聲。

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