激光共聚焦電子顯微鏡檢測(cè)前的關(guān)鍵技術(shù)步驟就是進(jìn)行樣品制備。樣品需要用不同的單，雙和三類(lèi)的熒光探針標(biāo)記。標(biāo)本可以是固定的或活著的組織或附著培養(yǎng)物。細(xì)胞應(yīng)培養(yǎng)在共聚焦特殊碟或蓋，懸浮細(xì)胞，萼片或滴，并蓋玻片。

樣品的Z大不同厚度約1~2mm，蓋玻片厚度應(yīng)小于0.17mm，滑塊厚度一般應(yīng)在0.8~1.2mm之間，表面要光滑，厚度要均勻，沒(méi)有一個(gè)明顯的干擾熒光。固定標(biāo)準(zhǔn)樣品通常用密封片密封，通常需要使用企業(yè)通過(guò)研究使用pH 8.5-9的PBS制備的甘油密封。

常規(guī)樣品制備要求

⒈染料的選擇

由于激光共聚焦顯微鏡采用單波長(zhǎng)激光作為光源，熒光染料的選擇應(yīng)以激光共聚焦顯微鏡的激光波長(zhǎng)為基礎(chǔ)。 如果同一樣品中有多個(gè)熒光染料，盡可能考慮它們的發(fā)射波長(zhǎng)。 不要重疊，避免交叉顏色問(wèn)題。

⒉樣品載體的選擇

一般的激光共焦顯微鏡高倍物鏡是一種油鏡。其數(shù)值不同孔徑小，鏡片與樣品數(shù)據(jù)之間的工作時(shí)間距離不大于0.17mm。因此，如果觀(guān)察分析樣品是粘附細(xì)胞或組織網(wǎng)絡(luò)切片，則可以使用一個(gè)普通用戶(hù)負(fù)荷，滑蓋玻璃就可以了。對(duì)于懸浮的細(xì)胞或顆粒，可以通過(guò)在激光共聚焦顯微鏡的培養(yǎng)皿中攜帶樣本來(lái)觀(guān)察。

⒊密封片的選擇

如果僅需要進(jìn)行觀(guān)察分析樣品一次并且我們不太容易淬滅熒光，則可以使用具有一定濃度的甘油混合物來(lái)密封膜。如果一個(gè)樣品需要放置一段發(fā)展時(shí)間并且樣品需要經(jīng)過(guò)多次使用，則應(yīng)使用抗熒光淬火密封來(lái)減少熒光信號(hào)損失。