細(xì)菌涂片及細(xì)菌染色是微生物學(xué)的基本技術(shù)，也是觀察細(xì)菌很簡單且行之有效的方法，是微生物檢測人員常用技能之一。通常情況下，由于細(xì)菌個體較小，較透明或半透明，如未經(jīng)染色往往不以觀察識別。因此借助于染色法可以使細(xì)菌著色，與視野背景形成鮮明對比，從而易于在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

微生物檢測常見的細(xì)菌染色方法包括簡單染色、負(fù)染色、革蘭氏染色、芽孢染色法、鞭毛染色、莢膜染色、死活染色。制備細(xì)菌染色片一般要經(jīng)過涂片、固定、染色、水洗、干燥等步驟，然后顯微鏡廠家微儀顯微鏡觀察。

5. 鞭毛染色法

鞭毛是細(xì)菌的運動器官，非常纖細(xì)，超出了光學(xué)顯微鏡觀察尤限，因此通常情況下在顯微鏡下觀察不到。通過特殊的染色技術(shù)，可以將染色液附加到鞭毛的周圍，增加它的直徑，從而能在光學(xué)顯微鏡下觀察到鞭毛。鞭毛染色一般分銀鹽法和復(fù)紅沉淀法兩種。

這里介紹一下銀鹽沉淀法。用作鞭毛染色的載玻片要是相對干凈無油脂的，將載玻片在火焰上快速灼燒5s，放在染色架上冷卻，用蠟筆分成兩個區(qū)域，然后用移液管或者巴斯德移液管吸取2mL無菌水加入到幼齡生長活躍的斜面菌株中，慢慢震蕩并旋轉(zhuǎn)試管使菌株懸浮，盡量避免使用接種環(huán)，將懸液轉(zhuǎn)移到干凈的試管中，通過懸滴試驗檢查菌體的運動型，用無菌水將懸浮液稀釋至略有渾濁為止，放入20-30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min，然后移取一滿環(huán)懸浮液加在已冷卻的載玻片一端，傾斜載玻片讓液滴流到蠟筆畫的中心線，在空氣中自然干燥。然后用媒染色劑媒染5min之后，慢慢用蒸餾水充分漂洗掉所有的媒染液，用熱的Fontana銀鹽覆蓋，染色5min，每隔1min更換一次染色液（Fontana銀液在沸水浴中加熱），細(xì)菌涂層的每一部分都要浸在染色液中，不能裸露。用水沖洗，自然晾干即可進(jìn)行鏡檢。應(yīng)當(dāng)注意一點，染色法的燃料須當(dāng)日配制，4h內(nèi)使用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

6. 莢膜染色

一般細(xì)菌的莢膜與染色劑的親和性低，但莢膜通透性高，因此染料可以透過莢膜使菌體著色。一般采用負(fù)染色方法使背景和菌體之間形成一透明區(qū)，將菌體襯托出來便于觀察分辨。

莢膜染色的步驟：加一滴6%葡萄糖水溶液在載玻片的一端，無菌操作，挑取細(xì)菌斜面上培養(yǎng)72h左右的膠質(zhì)芽孢桿菌與其混合，加1滴墨汁充分混勻，用推片法制片將菌液鋪成薄層，自然干燥，滴加1-2滴無水乙醇覆蓋涂片，固定1min，自然干燥，在已晾干的涂面上，滴加1%結(jié)晶紫染色液染色，2min后用20%的硫酸銅沖洗數(shù)次，再用自來水沖洗一次，使用擦鏡紙擦干后即可鏡檢。有莢膜的菌菌體呈紫色，背景灰黑色，莢膜不著色呈無色透明圈。具體操作過程見下圖：

7. 死活染色

細(xì)菌死活染色排除法是生物研究中判斷細(xì)胞活性的一種常用方法，是利用死活細(xì)胞在生理機(jī)能和性質(zhì)上的差異來進(jìn)行的，常用的染色劑有臺盼藍(lán)和美藍(lán)，前者使用范圍較廣，后者一般在酵母菌細(xì)胞死活鑒定上使用較多。

以上就是顯微鏡廠家介紹的細(xì)菌染色法，基本上涵蓋傳統(tǒng)微生物實驗室能用到的所有的細(xì)菌染色法。染色法在細(xì)菌的觀察、分類、鑒定中經(jīng)常用到，因此是微生物檢測人員不可或缺的基本技能之一。

文章內(nèi)容來源：環(huán)凱微生物